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1、实验原理
紫外线（UV）根据波长的不同，可分为紫外线C（UVC，波长：100-290 nm）、紫外线B（UVB，波长：290-320 nm）和紫外线A（UVA，波长：320-400 nm）UVC大部分被臭氧层阻挡，很少到达人体皮肤，而UVA和UVB都可以穿透臭氧层，分别占到达皮肤的紫外线辐射的95%和5%左右。
图1.UV辐射皮肤示意图
太阳紫外线辐射 （UVR） 穿透皮肤。根据波长，UVR 分为三类：UVA、UVB 和 UVC。UVC 被臭氧层阻挡，UVB 可以渗透到表皮，UVA 可以渗透到真皮。
长期暴露在紫外线下会导致DNA损伤、氧化应激、炎症和细胞凋亡，从而导致皮肤损伤的外部迹象：皮肤松弛、色素沉着过度等。紫外线可以与细胞中的显色基团和光敏剂相互作用，产生ROS，ROS主要包括超氧阴离子（O2−）、过氧化氢（H2O2）、羟基自由基（·OH）和单线态氧（1O2）。
超氧化物歧化酶（SOD）被认为是抗氧化系统中抵御氧化应激的第一道防御屏障，因为它能够催化剧毒的O2–转化为毒性较小的H2O2和O2，然后过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）将H2O2解毒成无毒的H2O和O2。除了抗氧化酶外，非酶抗氧化剂还负责维持细胞活性氧平衡，抗坏血酸（AsA）和谷胱甘肽（GSH）是主要的非酶促抗氧化剂，抗坏血酸-谷胱甘肽（AsA-GSH）循环被认为是H2O2解毒的最有效途径。ROS清除过程中的任何一个失调都会导致产生过量的ROS，对蛋白质、DNA和脂质造成广泛损害，从而影响正常的细胞功能。
图2.ROS的产生与消除
图2.ROS的产生与消除
DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基是一种稳定的有机自由基，其分子结构中存在一个未配对的电子，一些抗氧化剂：1.能够提供氢原子，与DPPH自由基中的未配对电子结合，使自由基转变为稳定的分子；2.通过转移电子来中和自由基，这些抗氧化剂通常具有较低的还原电位，能够将电子转移给DPPH自由基，使其未配对电子得到配对，从而转变为稳定的分子；3.抗氧化剂可以与DPPH自由基发生加成反应，形成稳定的加成物。这种转变导致DPPH溶液在517 nm处的吸收峰减弱或消失，溶液颜色从紫色变为浅黄色或无色，发挥抗氧化剂的清除能力。
ABTS是一种含有两个苯环和两个磺酸基团的化合物，其结构使其具有良好的水溶性和稳定性。ABTS可以通过化学方法生成自由基（如ABTS·⁺），这种自由基在特定条件下（如碱性环境）呈蓝色，可以通过分光光度法（通常在734 nm处测量吸光度）检测。当样品中的抗氧化剂与ABTS·⁺反应时，自由基被还原，蓝色褪去，吸光度降低。通过比较样品与对照组的吸光度变化，可以评估样品的抗氧化能力。
图3.1,1-二苯基-2-三硝基肼自由基（DPPH∙）的化学结构
本实验拟通过检测UV辐射后，利用人真皮成纤维细胞/人永生化角质形成细胞构建实验模型，检测ROS含量，SOD、GSH-PX、MDA、CAT等活力以及生化法检测DPPH、ABTS清除能力，多维度评价样品是否具有抗氧化功效。
2、检测项目
3.检测流程
4.部分结果展示
图1.ROS平均荧光强度典型图
图2.MDA含量柱形图
与模型对照组比，***p<0.001
图3.SOD活力柱形图
与模型对照组比，*p<0.05，**p<0.01
图4.GXH-PX活力柱形图
与模型对照组比，***p<0.001
图5.抗氧化作用柱形图
与模型对照组比，***p<0.001
5.结果描述
根据测试结果，与正常对照组比，模型对照组的ROS平均荧光强度显著增强，SOD、MDA、GSH-PX等活力含量显著下调，说明本次刺激条件有效；
与模型对照组比，阳性对照组的ROS平均荧光强度显著减弱，，SOD、MDA、GSH-PX等活力显著上调，说明本实验有效且可靠。
与DPPH对照组比，阳性对照组的DPPH清除率显著上调，说明本实验有效且可靠。
6.参考文献
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