化妆品抗糖化作用实验方案

1、实验原理

糖化反应在体内和体外皆可发生，对应生成的晚期糖化终末产物（Advanced glycation end products，AGEs）也被称为外源性AGEs和内源性AGEs。体内和体外形成AGEs的一般途径分为三个部分：羰基与自由氨基结合得到的糖胺，经脱水后形成席夫碱；席夫碱经过葡糖胺重排反应得到更稳定的氯胺酮；这些重排产物和其他反应性二羰基衍生物在不同的反应条件下结合起来产生AGEs。

人体摄入外源性AGEs最常见的途径是饮食，通过食用含有高浓度AGEs的食物向体内带来大量的外源性AGEs。这些膳食高级糖化终产物（dietary AGEs，dAGEs）一方面自然存在于各类食品原料中，另一方面也通过烹饪（尤其是高温烘烤、油炸）过程给食物带来额外的dAGEs。内源性糖化是生理条件下于所有组织和体液中的自发进行的非酶糖化反应（Non-enzymatic glycation reaction，NEG），具体化学途径与外源性糖化生成AGEs的过程相似，其中内源性AGEs主要由葡萄糖和体内的游离氨基酸（特别是赖氨酸和精氨酸）结合形成；还有一些独特的内源性AGEs形成途径包括无氧糖酵解、多元醇途径和脂质过氧化途径。在高血糖的条件下，机体会加强对多元醇途径的激活，造成上游代谢物的积累增加，促进二羰基等中间产物的形成，最终与蛋白质结合形成AGEs。另外，活性氧（ROS）的增多会引起的脂质氧化降解过程加剧，使脂质发生过氧化反应形成另一类被称为高级脂质氧化终产物（Advanced lipoxidation end products，ALEs）的活性二羰基化合物。氧化应激和糖化反应会相互促进，ROS过度产生、积累会增加活性醛及其衍生物的含量，最终导致内源性AGEs的大量生成。

糖化造成的损伤是全身性的，因此皮肤作为身体中最大的器官受到的糖化损伤最为直观、明显；在糖化对皮肤的各种不利影响中，衰老表征的加剧最为明显。NEG使皮肤更容易表现出干燥度增加、弹性降低、皱纹和色素沉着等衰老问题。皮肤中的糖化现象很普遍，迄今为止，在皮肤中已经发现了12种AGEs，主要是葡萄糖烷、果糖基赖氨酸、CML、戊糖苷和N-羧基乙基赖氨酸（CEL），其中被研究最多的是CML。

因此本实验拟利用人真皮成纤维细胞构建实验模型，通过检测CML含量以及体外利用葡萄糖与牛血清白蛋白发生糖化反应生成AGEs，来评价样品是否具有抗糖化作用。

2、检测项目

3.检测流程

4.部分结果展示

图1.AGEs荧光强度柱形图

与空白对照组比，***p<0.001

图2.CML免疫荧光典型图

5.结果描述

根据测试结果，与正常对照组比，阳性对照组的AGEs荧光强度显著下调，说明本实验有效且可靠。与正常对照组比，模型对照组的CML平均荧光强度显著上调，与模型对照组比，阳性对照组的CML平均荧光强度显著下调，说明本实验有效且可靠。

6.参考文献

[1] 崔珏.牛蒡多酚对荧光性晚期糖基化终产物形成的抑制作用[J].食品科技,2019,44(04):220-224.

[2] Liao X, Brock A A, Jackson B T, et al. The Cellular Antioxidant and Anti-Glycation Capacities of Phenolics from Georgia Peaches[J]. Food Chemistry, 2020, 316:126234.

[3]周凯文,陈晓默,刘慧琳,王静.多酚黄酮物质对晚期糖基化终产物的抑制研究[J].食品研究与开发,2018,39(04):7-13.

[4] 范智义, 李晓琳, 李巨秀. 桑椹提取物中酚类化合物的抗氧化及抗糖基化活性分析[J]. 食品科学, 2016, 37(17): 19-26.

[5] 刘长江, 潘松, 梁爽. 软枣猕猴桃多糖体外抗氧化活性[J]. 食品科学, 2012, 33(23):4.

[6] 侯玉婷, 苏金芳, 陈诗悦, 胡风庆, 祝儒刚. 不同方法提取的山楂果胶理化性质及体外抗糖化活性的对比[J]. 现代食品科技, 2018, 34(04): 159-166.

[7] 周慧吉,李廷钊,李波.多模型评价槐花水提物的抗糖化作用及其活性成分研究[J].食品工业科技, 2023.

[8] Yang C T , Meng F H , Chen L ,et al.Inhibition of Methylglyoxal-Induced AGEs/RAGE Expression Contributes to Dermal Protection by N-Acetyl-L-Cysteine[J].Cellular Physiology and Biochemistry, 2017, 41(2):742-754.

[9]岳开妍.具有抗糖作用的后生元挖掘及功效成分解析[D].江南大学,2024.

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