利用斑马鱼模型评价改善肺气虚功效

【评价原理】

肺气虚证为肺系病的常见证候，以肺功能减退为主的全身性病变，以喘咳无力、气少不足以息，动则益甚，痰液清稀，声音低怯，面色淡白，或自汗、畏风等为常见证候。肺气虚证是多种慢性肺疾病如慢性阻塞性肺疾病（COPD）发生发展的关键原因。COPD以气道不完全可逆性气流受限为特征，与肺对有害气体或有毒颗粒的异常炎症反应有关。氧化应激是由于氧化剂增多或抗氧化剂减少导致的氧化/抗氧化失衡状态，氧化应激损伤被认为是COPD 主要发病机制之一，LPS是脂质和多糖的复合物，来源于革兰氏阴性菌细胞壁的外膜，是内毒素的主要成分。在LPS作用下，斑马鱼体内炎性细胞如中性粒细胞被募集与激活，激活后的炎性细胞浸入肺组织并释放炎症介质，同时出现运动能力下降，与人体肺气虚的喘咳无力、气少不足以息的症状颇为相似。采用LPS诱导斑马鱼肺气虚模型，同时通过供试品进行干预，评价供试品对肺气虚的改善功效。

我们评价改善肺气虚功效有多个指标：1.总运动距离；2.鱼鳔中性粒细胞数量；3.整体MDA、SOD、GSH水平；4.鱼鳔部位组织病理学切片；5.QPCR检测相关基因表达量：il1b、il6、tnfa、tnfb等。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。其中正常对照组不进行其他处理，模型对照组和供试品组均用LPS诱导。供试品组在LPS处理后，立即摄入供试品。

服用一段时间供试品后，经行为分析仪检测斑马鱼总运动距离，置于荧光显微镜下检测鱼鳔中性粒细胞数量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼轨迹典型图

（黑、绿、红线分别为慢、中、快速运动距离）

图2 斑马鱼鱼鳔中性粒细胞数量典型图

从实验结果可以看到，服用供试品后，总运动距离比模型对照组明显增加，鱼鳔中性粒细胞数量比模型对照组明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，相对于模型对照组，服用或者注射供试品组之后，总运动距离增加、鱼鳔中性粒细胞数量降低。

2.本实验证实供试品组具有改善肺气虚功效。

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