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【评价原理】
肠炎属于消化道疾病的一种,病发的主要原因有饮食不规律、酗酒、暴饮暴食等。不规律饮食习惯和饮食结构的变化使我国肠炎发生率持续升高。用不规律加高糖饮食处理斑马鱼,加重其肠道消化负担,诱使肠道分泌紊乱,引发肠道功能障碍,最终导致肠炎发生。
我们评价改善不规律饮食诱导的肠炎功效有多个指标:1.肠道组织病理切片;2.检测炎症相关基因(il1b、il10、il12)相对表达量;3.肠道脂肪酶活性;4.体重;5.肠道重量。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用供试品组。其中正常对照组常规规律饲喂,模型对照组与服用供试品组均饥饿处理一段时间后,再给予高糖饮食。供试品组在高糖饮食基础上同时摄入供试品。
服用一段时间供试品后,我们收集斑马鱼样本,采集肠道组织,制作病理切片观察肠道的病理结构变化,检测炎症和免疫相关基因(il1b、il10、il12)相对表达量。
【结果展示】
图1. 斑马鱼肠道组织病理切片
从病理切片中可以看到,正常对照组斑马鱼:(1)肠管壁较厚,肌层(a1,蓝色双向箭头)发达;肠管较粗,肠内绒毛十分发达,高度长,面积大,呈交错分支状或指状;发达的肌层可提供有力的肠道蠕动力,厚实的肠绒毛利于食物与吸收细胞充分接触。(2)杯状细胞(b,黑色单向箭头)数目众多,细胞头部大且圆,成行排列于肠绒毛上皮细胞之间;杯状细胞分泌黏液为肠道提供充分的黏液屏障。(3)淋巴细胞(c,黄色单向箭头)单层分布于柱状上皮细胞内侧,起到“哨兵”作用,对肠道内外感染起到及时响应作用。
不规律加高糖饮食处理斑马鱼后,斑马鱼肠管壁变薄(a2),绒毛稀疏且高度明显降低,肠腔扩张(d,黑色双向箭头);杯状细胞数目明显减少;柱状上皮细胞排列紊乱,淋巴细胞减少。表明模型对照组肠道微生态环境破坏,肠蠕动功能减弱,肠道黏液屏障和免疫屏障受损。
供试品组斑马鱼肠道组织形态较模型对照组有所改善,具有增强肠道黏液屏障功效。
图3. il1b、il10、il12基因相对表达量
可以看到,模型斑马鱼il1b基因表达显著增加,服用供试品组该基因表达量明显减少;模型斑马鱼il10、il12基因表达显著减少,服用供试品组上述基因表达量明显增加。
【评价结论】
1.经过每组10尾斑马鱼的对比实验,服用或注射供试品组斑马鱼肠道组织形态较模型对照组有所改善,具有增强肠道黏液屏障功效;肠道炎症基因il1b相对表达量较模型对照组显著减少,肠道免疫基因il10、il12相对表达量较模型对照组显著增加,具有改善肠道炎症和增加肠道免疫功效。
2.本实验证实供试品组对斑马鱼肠道黏液屏障保护、改善肠道炎症和增加肠道免疫功效。
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