利用斑马鱼模型评价非酒精性脂肪肝（TAA诱导）辅助保护功效

【评价原理】

硫代乙酰胺具有直接肝毒性作用，摄入后经肝细胞内细胞色素P450混合功能氧化酶代谢为TAA硫氧化物，干扰细胞核内RNA转移，影响蛋白质合成和酶活力，增加肝细胞核内DNA合成及有丝分裂，促进肝硬化发展；同时激活肝细胞磷脂酶A2，破坏肝细胞膜，形成肠源性内毒素血症，导致大面积肝细胞破坏，并可使ALT、AST明显增高。在硫代乙酰胺的作用下，斑马鱼幼鱼肝脏中抗凋亡基因bcl2和mcl1b的表达水平下降，促凋亡基因bax表达水平上升，从而诱导肝细胞凋亡，并使ALT、AST明显升高。故硫代乙酰胺诱导肝脏细胞线粒体、内质网、高尔基体等细胞器损害后，肝细胞中的脂肪酸以甘油三酯的形式储存在肝细胞，无法通过线粒体、高尔基体代谢生成低密度脂蛋白运输出肝脏。当甘油三酯输出肝细胞受阻或β-氧化速率降低就会发生肝脏脂肪变性甚至导致非酒精性脂肪肝。故甘油三酯大量堆积在肝脏，使用油红O染色后斑马鱼肝脏变深。油红O属于偶氮染料，具有很强的脂溶性和染脂性，在脂类中的溶解度比溶剂中大，可与甘油三酯结合呈小脂滴状，进入斑马鱼体内时油红O溶于组织内的脂质（脂滴）中，使其呈橘红色，因此油红O染色技术可以用来鉴定肝脏组织脂肪沉积情况。

我们评价非酒精性脂肪肝（TAA诱导）辅助保护功效有多个指标：1.肝脏脂肪染色强度；2.AST、ALT活力；3.肝脏病理切片。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。其中正常对照组不进行其他处理，模型对照组和供试品组均用TAA诱导。供试品组在TAA处理后，立即摄入供试品。

服用一段时间供试品后，对斑马鱼整体进行油红O染色，经解剖显微镜检测斑马鱼肝脏脂肪染色强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肝脏脂肪染色强度表型图

(黄色区域为肝脏)

从实验结果可以看到，服用供试品组斑马鱼肝脏脂肪染色强度较模型对照组显著减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用或注射供试品组的斑马鱼肝脏脂肪染色强度较模型对照组显著减少。

2.本实验证实供试品具有非酒精性脂肪肝辅助保护功效。

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