利用斑马鱼模型评价非酒精性脂肪肝（食物诱导）辅助保护功效

【评价原理】

斑马鱼的肝脏结构细胞类型高度保守，虽与哺乳动物存在一定差异，但除了肝脏免疫细胞（Kupffer细胞）外，其他哺乳动物肝脏中的细胞在斑马鱼中都已发现，并且其功能和哺乳动物相同，包括胆汁分泌、糖原和脂质储存、胰岛素反应、异生物质和氨代谢，以及血清蛋白的分泌。高糖高脂饲喂斑马鱼，其所提供的能量往往超过鱼自身所需，过剩的能量以游离脂肪酸的形式储存在肝脏中，并激活脂肪从头生成过程，使肝脏中脂肪含量持续增加，引发脂质代谢紊乱；并上调内质网应激基因atf6，hspa5和hsp90b1表达量，引发内质网功能障碍，最终导致肝细胞脂肪变性，形成脂肪肝，经油红O染色后可观察到肝脏染色变深。油红O（Oil Red O，ORO）属于偶氮染料，具有很强的脂溶性和染脂性，在脂类中的溶解度比纯溶剂中大，可与甘油三酯结合呈小脂滴状，进入斑马鱼体内时油红O溶于组织内的脂质（脂滴）中，使其呈橘红色，因此油红O染色技术可以用来鉴定肝脏组织脂肪沉积情况，具有细胞定位功能，有助于判断及定性疾病。

我们评价非酒精性脂肪肝（食物诱导）辅助保护功效有多个指标：1.肝脏脂肪染色强度；2.肝脏病理切片；3.Fe2+荧光强度；4.ROS荧光值；5.GSH含量；6.组织中ALT活力；7.组织中AST活力。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。其中正常对照组不进行其他处理，模型对照组和供试品组均用高糖高脂饲料诱导。供试品组在高糖高脂饲料处理后，立即摄入供试品。

服用一段时间供试品后，对斑马鱼整体进行油红O染色，经解剖显微镜检测斑马鱼肝脏脂肪染色强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肝脏脂肪染色强度表型图

(黄色区域为肝脏)

从实验结果可以看到，服用供试品组斑马鱼肝脏脂肪染色强度较模型对照组显著减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用或注射供试品组的斑马鱼肝脏脂肪染色强度较模型对照组显著减少。

2.本实验证实供试品具有非酒精性脂肪肝（食物诱导）辅助保护功效。

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