利用斑马鱼模型评价预防便秘功效

【评价原理】

斑马鱼肠道结构与哺乳动物相似，分为前肠、中肠和后肠。前肠和中肠类似于小肠，主要参与营养物质的吸收；后肠主要参与水分吸收，类似于大肠。斑马鱼消化道的解剖结构、组织细胞形态与人类消化道相似，具有上皮层、固有层和肌肉层。斑马鱼发育至5 dpf，其消化道出现了自发且有节奏的肌肉收缩活动，与人肠道相似的肠道蠕动功能。一氧化氮（NO）是肠神经系统中最重要的抑制性神经递质之一，能抑制胃肠道平滑肌的运动。一氧化氮合酶（NOS）是内源性NO产生的关键酶，NOS增多可以持续性地抑制胃肠道的运动。斑马鱼NOS基因nos1、nos2a和nos2b分别与人NOS1、NOS2同源。硫酸铝能吸收肠道内水分使形成结晶水，引起大便干燥，同时抑制肠道蠕动和推进，最终引起便秘。给斑马鱼摄入供试品一段时间后，给斑马鱼喂食一种特异性活体荧光染料尼罗红，再用硫酸铝诱导建立斑马鱼便秘模型，一段时间后通过分析斑马鱼胃肠道尼罗红的量（荧光强度）来评价样品预防便秘功效，若样品有预防便秘功效，则斑马鱼肠蠕动加快，胃肠道内残留的尼罗红减少，荧光强度减弱。

我们评价预防便秘功效有多个指标：1.肠道荧光强度；2.肠道NO荧光强度；3.QPCR检测相关基因表达量：nos1、nos2a和nos2b。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。供试品组摄入供试品一段时间后，移除供试品。所有组摄入尼罗红，一段时间后，移除尼罗红。正常对照组未摄入硫酸铝，模型对照组与服用供试品组都摄入了等量的硫酸铝测斑马鱼肠道荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肠道荧光强度表型图

(红色荧光为尼罗红)

从实验结果可以看到，服用供试品组斑马鱼肠道荧光强度较模型对照组显著减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用或注射供试品组的斑马鱼肠道荧光强度较模型对照组显著减少。

2.本实验证实供试品具有预防便秘功效。

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