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皮脂腺是雄激素的来源和目标组织，皮脂腺中产生脱氢表雄酮，经过一系列的酶催化转化为最活跃的睾酮和5α-双氢睾酮，他们能够刺激脂质的合成以及皮脂腺细胞的增殖分化。尼罗红（Nile Red）是一种亲脂性的荧光染料，能够与细胞内的中性脂质（如甘油三酯）结合并发出荧光。其荧光强度与细胞内的脂质含量成正比，因此可以通过荧光显微镜观察检测细胞内的脂质含量。
皮脂腺细胞的脂质合成需要细胞内相关脂质基因表达的激活。固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein, SREBP)介导的脂质代谢通路是研究脂质代谢调控机制的首要环节，其中SREBP是脂质代谢通路中的关键调控因子，调控外源脂质的摄入和内部脂质合成等过程。SREBP-1C属于SREBP家族，是脂质代谢信号转导的关键调节因子。脂滴包被蛋白(PLIN)家族成员之一的PLIN2，也称为脂肪分化相关蛋白，参与脂质代谢并影响脂肪沉积。在皮脂腺细胞中，PLIN2可能通过影响脂质的合成与分解代谢，进而对皮脂分泌产生调控作用。PPARγ（过氧化物酶体增殖激活受体γ）在皮肤生理学中扮演着重要角色，尤其是在皮脂分泌和炎症反应的调控中。PPARγ通过靶向LPL（脂蛋白脂酶）、ANGTPL4（血管生成素相关蛋白4）和CIDEC（细胞死亡诱导因子C）等基因，促进脂肪细胞的自我更新。PPARγ和C/EBPα通过正反馈形式的相互调控促进下游脂肪分化相关蛋白的表达水平，也包括脂肪合成相关基因的转录。此外，PPARγ激活可以提升脂肪细胞和肝细胞中周脂素(PLIN)基因的表达水平，这对于脂滴(LD)的形成至关重要。周脂素的表达量可以决定脂滴的丰富性。有研究证明，激活PPARγ可以促进PLIN1、PLIN2和PLIN3 mRNA的表达，同时上调甘油-3磷酸酰基转移酶(Gpat)和二酰基甘油酰基转移酶(Dgat)的表达水平，进而促进甘油三酯(TAG)合成与脂滴(LD)形成。脂肪酸合成酶（FAS）是脂肪酸合成的关键酶，负责将乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）和丙二酰辅酶A（Malonyl-CoA）合成脂肪酸。ACACA（乙酰辅酶A羧化酶A，ACC）是脂肪酸合成途径中的一个关键酶，它催化脂肪酸生物合成的第一步反应，即乙酰辅酶A转化为丙二酸单酰辅酶A。硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）负责将饱和脂肪酸转化为单不饱和脂肪酸，是脂肪酸去饱和的关键酶。
图1.参与脂质合成的关键基因
脂质合成是皮脂腺细胞分化的终末指标，瘦素、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素和TNF-α等细胞因子参与调节其脂质合成，成为寻常痤疮发生的重要致病因子。胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)是一种在细胞增殖、分化、转化中发挥作用的跨膜受体。它与皮脂腺细胞分泌油脂的作用相关，它可以影响细胞的增殖和分化，这些过程也与皮脂腺细胞的功能相关。IGF-1R的激活可以通过特定的信号传导路径，如MAPK和PI3K/AKT，促进细胞增殖和生长，这可能间接增加皮脂细胞的油脂产生。此外，IGF-1R信号通路在一些皮肤病的发展中也起作用，例如痤疮和银屑病，这些疾病与皮脂腺的过度活跃有关。在这些情况下，IGF-1R的激活可能导致皮脂腺细胞的过度增殖和油脂产生，从而加剧皮肤病症状。
图2.IGF-1影响痤疮发生的分子机制
在皮肤中，5α还原酶是皮肤油脂分泌的一个关键限速酶，主要负责将睾酮转化为双氢睾酮（DHT），后者是一种更强力的雄激素，具体传导路径如图3所示。双氢睾酮（DHT）在皮脂腺内积累到较高水平时，它会引发皮脂腺细胞的一系列病理变化。这种变化会促使皮脂腺细胞过度活跃，导致它们分泌出过多的油脂。因此，通过降低或抑制5α还原酶的活性或表达量，可以有效地减少皮脂腺的油脂分泌量。换句话说，调控5α还原酶是控制皮脂过度分泌的一种策略，有助于缓解与皮脂分泌过多相关的问题。
图3.人5α-还原酶在皮肤油脂分泌过程中的作用
因此，本实验拟通过利用DHT诱导人皮脂腺细胞活化模型，通过尼罗红染色法检测人皮脂腺细胞脂质的积累，通过RT-QPCR检测人皮脂腺细胞内脂质代谢相关基因表达量（PPARγ、SREBP-1C、IGF-1R、PLIN2、FAS、SCD和ACC），通过理化方法检测5α-还原酶抑制率，多维度评价样品样品是否具有控油功效。
尼罗红染色检测细胞脂质积累
RT-QPCR检测脂质代谢相关基因(PPARγ, SREBP-1C, IGF-1R, PLIN2, FAS, SCD, ACC)表达量
5α-还原酶抑制率检测
图1.5α-还原酶抑制率柱形图
与空白对照组比，***p<0.001
图2.PPARγ基因相对表达量柱形图
与模型对照组比，*p<0.05，**p<0.01
图3.SREBP-1C基因相对表达量柱形图
与模型对照组比，*p<0.05，**p<0.01
图4.SCD基因相对表达量柱形图
与模型对照组比，**p<0.01
图5.平均荧光强度典型图
根据测试结果，与正常对照组比，模型对照组的平均荧光强度显著增强，PPARγ，SREBP-1C，SCD等基因相对表达量显著上调，说明本次刺激条件有效；
与模型对照组比，阳性对照组的平均荧光强度显著减弱，PPARγ，SREBP-1C，SCD等基因相对表达量显著下调，说明本实验有效且可靠。
与空白对照组比，阳性对照组的5α-还原酶抑制率显著上升，本实验有效且可靠。
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