降血糖 实验方案

一、实验动物

品系：C57BL/6小鼠

性别：雄性

年龄：6-8周龄

二、实验分组

1）正常对照组：空白对照

2）模型对照组：STZ造模

3）阳性药对照组

4）低剂量组：STZ造模+低剂量的受试样品（参考值：人体服用量5倍）

5）中剂量组：STZ造模+中剂量的受试样品（参考值：人体服用量10倍）

6）高剂量组：STZ造模+高剂量的受试样品（参考值：人体服用量20倍）

每组数量一般为10-12只（STZ注射造模有10%左右的死亡率），最少8只

三、实验方法

1）配制STZ造模剂：

将2.10 g柠檬酸加入双蒸水100 ml配成柠檬酸母液，称为A液；

将2.94g柠檬酸三钠加入双蒸水100 ml配成柠檬酸钠母液，称为B液；

将A、B液按1:1.32比例混合，pH计测定pH值，调定溶液pH=4.2-4.5，即是所需的0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液；

将STZ溶于0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液中，并用0.22μm滤菌器过滤除菌, 配制成10 mg/mL浓度的STZ溶液（避光配制，现用现配，5-10min内使用完）

2）完成适应性饲养后，除空白组外，其余小鼠不分组，每日腹腔注射60mg/kg STZ造模剂，连续5天。（每日造模需要在提前一天的下午5点半开始禁食（不禁水），再于当日早上8点半注射STZ，注射之后恢复正常饮食并提供10%蔗糖溶液饮水，防止应激性低血糖死亡。）

3）在饲养第6、7、8天连续3天检测空腹血糖，每天1次（禁食时间同造模），小鼠血糖值在 10－25mmol/L之间即视为造模成功，按上述安排进行分组

4）按上述分组给予药物灌胃，每日1次，共28天。

四、检测指标

1）给药期间：每周记录一次小鼠体重，空腹血糖，比较各组动物血糖值及血糖下降百分率。

2）口服葡萄糖耐受试验：第28天测量空腹血糖完成后按照上述分组给予药物灌胃，给药15-20分钟后，各组经口给予葡萄糖 2.0g/kg BW，测定各组给葡萄糖后 第0，0.5，2 小时的血糖值，绘制血糖曲线并按如下公式计算：

五、判断标准

空腹血糖和糖耐量二项指标中一项指标阳性，且对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品有助于维持血糖健康水平动物实验结果阳性。

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