化妆品促进细胞自噬作用实验方案

1、实验原理

细胞自噬是真核细胞中普遍存在的一种自我保护机制，细胞存在老化受损的细胞器、错误合成的蛋白质、入侵细胞的细菌以及大分子物质等，细胞自噬通过形成自噬体包裹这些对细胞有害的物质，并与溶酶体结合形成自噬溶酶体来分解、清除这些物质，保持细胞内环境稳态以及细胞内物质的循环利用。LC3-II和p62是细胞自噬途径中的两个关键蛋白，它们在自噬过程中发挥着重要的作用，分别参与自噬体的形成和自噬底物的识别与降解。在细胞质中，LC3主要以LC3-I的形式存在，当自噬被激活时，LC3-I会经过脂质化修饰，形成LC3-II。LC3-II能够识别并结合自噬体膜上的其他自噬相关蛋白（如ATG5-ATG12复合体），从而促进自噬体的成熟和与溶酶体的融合。p62（也称为SQSTM1）是一种多功能的蛋白质，它在细胞自噬过程中主要作为自噬底物的识别蛋白，p62能够识别并结合细胞内受损的蛋白质、蛋白质聚集体以及受损的细胞器等，它通过其泛素结合域（UBA）与泛素化的蛋白质相互作用，从而将这些需要降解的底物聚集在一起。LC3-II和p62在自噬过程中相互协作，p62通过其LIR结构域与LC3-II结合，将泛素化的底物连接到自噬体膜上，从而促进自噬体的形成和底物的降解，在自噬激活时，LC3-II的增加会促进p62的降解，从而减少细胞内p62的积累。

图1.LC3II-p62介导自噬模型

本实验拟利用人永生化角质形成细胞等构建实验模型，通过检测LC3II和P62蛋白表达，评价样品是否具有促进细胞自噬作用。

2、检测项目

3.检测流程

4.部分结果展示

图1.LC3II/β-Actin比值柱形图

与正常对照组比，*p<0.05

图2.p62/β-Actin比值柱形图

与正常对照组比，**p<0.01

图3.LC3II,p62,β-Actin典型图

5.结果描述

根据测试结果，与正常对照组比，阳性对照组的LC3II/β-Actin比值显著上调，p62/β-Actin比值显著下调，说明本实验有效且可靠。

6.参考文献

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