1. 养殖与繁殖管理

Q：斑马鱼为什么繁殖不好或者不产卵？

A：斑马鱼繁殖受多种因素影响，常见原因及建议如下：

水质问题：氨氮 >0.02 mg/L、亚硝酸盐 >0.1 mg/L 会显著抑制繁殖 → 定期检测并维护水质。

光周期不当：需要严格 14小时光照 / 10小时黑暗 循环 → 使用自动定时器。

亲鱼状态：雌鱼腹部不明显膨胀，说明可能未完全成熟 → 分开饲养 3–7 天后再合笼。

饲养密度过高：超过 7 条/升会抑制排卵 → 降低密度。

产卵容器设置：缸底无产卵垫或网格 → 加装底部网格，防止成鱼吞卵。

建议——

（1）合笼比例：2–3 条公鱼配 1 条母鱼；

（2）利用第一缕光照刺激产卵，光周期开始前将鱼转入产卵缸。

Q：幼鱼（5–15 dpf）死亡率高，怎么办？

A：幼鱼期高死亡率通常由以下原因引起：

真菌滋生：蛋黄饵料沉淀在缸底，幼鱼被真菌缠住。

→ 制作蛋黄饵料时，充分研磨干燥蛋黄并只取上清液使用。

亲本质量差：亲鱼状态不佳，受精卵质量差。

→ 优选经过驯化的幼鱼，能稳定摄食草履虫/卤虫，避免开口失败。

建议——

（1）若产卵质量持续不佳，增加饲养鱼卵数量以补偿损失；

（2）保持幼鱼缸清洁，及时清除残饵。

Q：斑马鱼出现炸鳞、腹水、烂鳍等疾病症状，如何处理？

A：疾病问题通常可通过改善环境预防，建议：

进行水质检测：评估 pH、氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐。

隔离病鱼：立即移至单独治疗缸，防止传染。

针对性治疗：

细菌性肠炎：庆大霉素药浴。

腹水病：前期提高水温至 28℃；后期氯霉素药饵。

炸鳞病（立鳞病） ：专用药物药浴 1 周左右。

注意：养殖参数：温度 28.5±1℃，pH 6.8–7.2，氨氮 <0.02 mg/L，硝酸盐 <5–10 mg/L。

新鱼检疫至少 2 周。

二、显微注射技术

Q：显微注射时，针头总是堵塞怎么办？

A：针头堵塞是最常见问题之一，按以下顺序排查：

预冷处理：注射前将针头插在冰上，防止细胞聚集。

检查针头类型：注射细胞时 绝不能使用带细丝的毛细管（细丝会撕裂细胞）。

防止 DNA 粘稠：向细胞悬液加微量 DNA 酶 I，减少细胞团块。

增大针头开口：适当回切针尖，但会增加鱼体损伤。

提高注射压力：瞬时高压冲开堵塞。

Q：RNA/mRNA 注射后胚胎不表达或卵黄泄漏，原因是什么？

A：常见原因及改进：

操作要点：

（1）使用 0.5–1.0 mm 无细丝毛细管，拉针仪控制针尖直径；

（2）在琼脂糖板上固定胚胎，设置注射参数：时间 40–60 ms，压力约 30 psi；

（3）胚胎须在 1 细胞期（受精后 30 分钟内） 完成注射。

Q：基因敲除后检测不到突变，或测序显示套峰？

A：出现套峰或检测不到突变的常见原因及应对：

检测方法敏感性不足：混合胚胎（嵌合体）PCR 直接测序看不出套峰。

→ 将 PCR 产物进行 T-载体克隆，至少送测 20 个阳性克隆。

引物设计问题：使用 NCBI Primer-Blast 设计高特异性引物。

野生型背景干扰：靶点附近存在多态性或串联重复序列。

脱靶效应：使用 RNP（Cas9 蛋白 + sgRNA） 递送系统可减少脱靶。

长期策略：

（1）嵌合体是常态，需多代杂交（F1 筛选）获得纯合子；

（2）早期致死时，考虑条件性敲除或母源性合子突变体。