化妆品修护功效实验方案

1、实验原理

皮肤的屏障功能主要位于角质层（SC），即皮肤的最外层。真皮和表皮之间的紧密连接是由基底膜形成的，在大约需要4周的时间的过程中，角质形成细胞的形态发生变化，并开始产生不同的角蛋白、生长因子和细胞因子，它们通过桥粒和紧密连接最后角质形成细胞变成角质细胞，这是最终的分化产物。通过这种方式，表皮通过平衡的增殖和分化过程不断自我更新。

角质层细胞内的角蛋白与胞外的丝聚合蛋白（Filaggrin，FLG），内披蛋白（Involucrin，IVL）、兜甲蛋白（Loricrin，LOR）等角质层之外的包膜蛋白质，以及细胞外基质、细胞紧密连接（Tight junctions,TJs）相互联结，构成了完整的皮肤屏障。富含蛋白质的角质形成细胞及角质层的蛋白外壳是皮肤屏障的主要物理屏障，细胞外基质构成了水屏障，而紧密连接TJs则构成了渗透性屏障并维持上皮的极性。细胞外基质富含脂质基质，脂质基质由神经酰胺、胆固醇、游离脂肪酸（FFAs）以及少量胆固醇硫酸盐和酯组成。膜蛋白claudin家族是TJs的核心成员，在TJs结构和功能上发挥了极其重要的作用，但TJs的其他成分如连接粘附分子（JAMs），膜脂，支架蛋白家族闭塞小带（ZO）的相分离，机械力也发挥了重要作用。

图1，屏障修护示意图

HaCaT细胞是一种具有永久增殖能力的角质形成细胞，因其和角质形成细胞有类似的结构、功能等，常被用于生物医学领域作为体外皮肤研究的细胞系，例如皮肤修复愈合和防晒等，因此本实验利用人永生化角质形成细胞（HaCaT），构建划痕实验模型，细胞增殖实验模型，皮肤屏障相关蛋白模型，多维度评价样品是否具有修护功效。

2、检测项目

3.检测流程

4.部分结果展示

图1.FLG基因相对表达量柱形图

与正常对照组比，***p<0.001

图2.LOR基因相对表达量柱形图

与正常对照组比，***p<0.001

图3.划痕愈合率典型图

图4.Edu染色典型图

5.结果描述

根据测试结果，与正常对照组比，阳性对照组的FLG,LOR等含量显著上调，划痕愈合率显著增加，EdU平均荧光强度显著增加，说明本实验有效且可靠。

6.参考文献

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