利用斑马鱼模型评价抗肿瘤功效（免疫共培养）

【评价原理】

斑马鱼与人类基因高度相似，在致癌基因、抑癌基因及细胞周期调控基因、蛋白氨基酸序列及功能保守。斑马鱼的适应性和先天免疫系统与人类高度保守。在斑马鱼中，先天免疫在受精后的第一天开始发育，并在受精后2天发育成熟；而适应性免疫系统在受精后约3周后成熟。在早期幼鱼发育过程中免疫功能不全的短暂窗口，可允许异种移植人的细胞短期存活，而无需对斑马鱼进行免疫抑制。通过这种方法，许多类型肿瘤细胞可以被移植到斑马鱼中，并研究癌细胞分化，增殖和迁移的机制，以及治疗。

将PBMC在体外激活，标记绿色荧光，将肿瘤细胞标记红色荧光，将两种细胞混合后注射到斑马鱼体内建立斑马鱼PDX（Patient-Derived tumor Xenograft，PDX）免疫共培养模型。斑马鱼幼鱼具有光学透明性的特性，可以直观地观察肿瘤的增殖、迁移或者药物分布等。许多癌细胞如乳腺癌，前列腺癌，结肠癌等在斑马鱼幼鱼中的细胞转移程度与其体外入侵潜力成正比，与体外实验或小鼠实验研究结果相似。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。其中正常对照组注射肿瘤细胞，模型对照组与服用供试品组都注射肿瘤细胞和激活的PBMC。供试品组同时还给予样品处理。

作用一段时间供试品后，用荧光显微镜拍照，观察肿瘤细胞荧光强度的变化情况。

【结果展示】

图1. 肿瘤细胞荧光强度典型图

从实验结果可以看到，给予PD-L1抑制剂后斑马鱼卵黄囊部位肿瘤细胞荧光强度明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供PD-L1抑制剂的斑马鱼卵黄囊部位肿瘤细胞荧光强度明显降低。

2.本实验证实阿维鲁单抗具有抗肿瘤功效。

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