利用斑马鱼模型评价改善脾阳虚功效

【评价原理】

脾为阴脏，居中焦、属土，为后天生化之本，气血生化之源，具有运化水谷精微、化生气血等生理功能，其生理特性是喜燥恶湿，故寒凉之物宜慎用。脾虚证主要表现为食欲不振、粪便稀湿、面黄肌瘦、神疲乏力等，脾虚“失健运”主要表现为消化吸收功能障碍，其机制与电节律、胃肠运动及激素水平等异常有关。长期饮食不节，饥饱失调，或久病体虚，聚水成湿，积谷为滞，湿滞内生，清浊不分，混杂而下，遂成泄泻。泄泻病机以脾胃虚弱最为关键。番泻叶性味甘苦寒，归属大肠经、专于泻下、纯泻无补，是建立脾虚泄泻模型的常用药物。斑马鱼消化道的解剖结构、组织细胞形态与人类消化道相似，具有上皮层、固有层、肌肉层。斑马鱼发育至5 dpf，其消化道出现了自发有节奏的肌肉收缩活动。番泻叶主要化学成分是番泻总苷类，在大肠中代谢成蒽酮或恩酚，后者刺激肠粘膜并能抑制钠离子从肠腔向肠粘膜上皮细胞的转运，影响大肠尤其是结肠对水吸收，使肠腔容积增大，并刺激肠壁反射性加剧小肠和结肠蠕动，促进肠粘膜释放前列腺素，在保护肠粘膜的同时，炎性介质致使肠细胞通透性增加，最终导致脾虚腹泻。采用番泻叶诱导斑马鱼慢性腹泻，建立斑马鱼脾阳虚模型（气虚加重进展到阳虚）。同时通过供试品进行干预，评价供试品改善脾阳虚功效。

我们评价改善脾阳虚功效有4个指标：1.肠道荧光强度（肠蠕动）；2.肠腔面积；3.肠道中性粒细胞数量；4.总运动距离。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。其中正常对照组进行其他处理式，模型对照组和供试品组均进行番泻叶处理。番泻叶先处理一段时间后，再摄入供试品。

服用一段时间供试品后，经荧光显微镜检测斑马鱼肠道荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肠道荧光强度典型图

从实验结果可以看到，服用供试品肠道荧光强度比模型对照组明显增加。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，相对于模型对照组，服用或者注射供试品组之后斑马鱼肠道荧光强度增加。

2.本实验证实供试品组具有改善脾阳虚功效。

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