利用斑马鱼模型评价耳保护功效

【评价原理】

耳与听力健康是人类健康的重要组成部分。近年来，随着我国人口老龄化、经济快速发展、生活方式转变等，耳聋和听力损失问题日益成为影响人民群众身心健康和生活质量的重要问题之一。

人类的听力受损大多数是由内耳的机械感觉受体毛细胞死亡造成的。斑马鱼的听觉外侧系统由耳囊和侧线两个关键的感觉结构组成，斑马鱼虽然没有外耳及中耳，但具有典型的内耳结构，其内耳行使着前庭和听觉功能；斑马鱼内耳和侧线的毛细胞在形态和功能上都与人的内耳毛细胞非常相似。斑马鱼毛细胞顶端是由密集的肌动蛋白组成的立体纤毛，内耳的毛细胞是次级受体，当声波传入时毛细胞纤毛发生变化并去极化，毛细胞把机械能信号转变为电信号并将信号传入大脑产生听觉。

硫酸阿米卡星属于氨基糖苷类抗生素，具有较强的耳毒性，能够杀死哺乳动物内耳中的感觉毛细胞，导致听力的永久性损伤。与人类内耳中的感觉毛细胞类似，斑马鱼的感觉毛细胞对氨基糖苷类抗生素的耳毒性反应也相当敏感。用硫酸阿米卡星处理斑马鱼，可导致斑马鱼耳囊和侧线毛细胞损伤，用特异性荧光染色（呈绿色），在荧光显微镜下可直接观察到毛细胞形态、数量和排列，耳损伤斑马鱼毛细胞荧光强度较正常斑马鱼明显暗很多。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。其中正常对照组未摄入硫酸阿米卡星，模型对照组与服用供试品组都摄入了等量的硫酸阿米卡星（硫酸阿米卡星通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用供试品组在摄入硫酸阿米卡星之前摄入供试品。

服用一段时间供试品后，我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色，观察毛细胞荧光的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼毛细胞荧光强度表型图

(红色虚线框为分析区域，绿色荧光颗粒为毛细胞)

从实验结果可以看到。模型对照组的毛细胞荧光强度较正常对照组明显减弱，供试品组相对模型对照组毛细胞荧光强度显著增强。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用或注射供试品组的斑马鱼毛细胞荧光强度较模型对照组显著增强。

2.本实验证实谷胱甘肽具有耳保护功效。

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