利用斑马鱼模型评价缓解关节疼痛功效

【评价原理】

关节疼痛主要表现为负重或活动诱发的钝痛/锐痛、关节肿胀及僵硬，伴活动受限及骨摩擦音。其根源是软骨损伤后基质降解、骨硬化及炎症因子放大，形成炎症-结构-神经敏化恶性循环。

斑马鱼软骨细胞主要分布于头部，起源于颅脑神经脊细胞（CNC），包括七对咽颅软骨弓（下颌弓、舌弓及五对鳃弓或1~7软骨弓）和脑颅软骨。斑马鱼与人的软骨在分子-细胞-组织三个层面具有高度相似性：①斑马鱼咽颅及脑颅软骨为典型透明软骨，细胞外基质富含Ⅱ型胶原与聚集蛋白聚糖，与人类关节透明软骨成分一致；②二者软骨细胞均起源于颅神经嵴间充质，经同源转录因子Sox9、BMP、Wnt信号级联调控分化；③斑马鱼软骨同样无血管和神经，且随年龄出现基质钙化与磨损，可模拟人类软骨退变。因此，斑马鱼是研究软骨发育及退行性关节疾病的理想脊椎动物模型。

地塞米松是一种人工合成的糖皮质激素，用地塞米松处理斑马鱼，可破坏斑马鱼软骨细胞的代谢平衡，抑制细胞增殖，引起软骨细胞的死亡或调亡，从而引起软骨损伤。

运用转基因软骨绿色荧光斑马鱼（呈绿色），结合斑马鱼幼鱼通体透明性，在荧光显微镜下可观察到软骨损伤的斑马鱼较正常斑马鱼软骨荧光强度要暗很多。

【实验方案】

我们将受测试软骨荧光斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。其中正常对照组未摄入地塞米松，模型对照组与服用软骨修复产品组都摄入了等量的地塞米松（地塞米松通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用供试品组在摄入地塞米松的同时摄入供试品。

服用一段时间供试品后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼软骨荧光的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼软骨荧光强度表型图

(绿色荧光为软骨)

从实验结果可以看到，服用供试品组斑马鱼软骨荧光强度较模型对照组显著增加。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用或注射供试品组的斑马鱼软骨荧光强度较模型对照组显著增加。

2.本实验证实供试品具有缓解关节疼痛功效。

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