利用斑马鱼模型评价改善肌少症功效

【评价原理】

肌肉减少症，即肌少症，是一种与增龄相关的肌肉量减少、肌肉力量下降和/或躯体功能减退的老年综合征。肌少症是老年人跌倒的主要危险因素，研究表明，随着年龄的增加，人整体机能逐渐减退包括肌肉功能下降、周围神经的髓鞘纤维自发性退化和周围神经萎缩等。

与人相似，斑马鱼随着年龄的增加，也会出现上述机体功能减退变化。骨骼肌占斑马鱼躯干的很大一部分，其在细胞和分子水平、肌纤维、肌肉超微结构水平和肌肉收缩特性方面与人类肌肉高度相似，斑马鱼肌肉分解基因trim63a（murf1）、fbxo32（atrogin-1）和肌生长抑制素mstna/mstnb分别与人基因TRIM63、FBXO32和MSTN同源。斑马鱼与哺乳动物的骨骼肌的生长方式均包括肥大（现有肌肉纤维直径或长度增加）和增生（增加新的肌肉纤维）。

地塞米松是一种人工合成的糖皮质激素，糖皮质激素是由肾上腺皮质分泌的内分泌激素，是骨骼肌肌蛋白降解和泛素蛋白酶体途径上调的重要介质，高剂量和长时间使用地塞米松可抑制可导致肌肉萎缩。用地塞米松处理斑马鱼，地塞米松通过激活糖皮质激素受体，抑制蛋白合成、增加蛋白质降解及线粒体凋亡通路，导致斑马鱼肌纤维损失、肌肉收缩蛋白损伤，呈现肌少症表型。

我们评价改善肌少症功效有多个指标：1.总运动距离（运动能力）；2.整体ATP含量；3.周围运动神经长度；4.髓鞘荧光强度；5.肌肉组织病理切片；6.qPCR检测相关基因表达量：肌肉生长相关基因（trim63a，fbxo32，mstnb）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。其中正常对照组未摄入地塞米松，模型对照组与服用供试品都摄入了等量的地塞米松（地塞米松通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用供试品组在摄入地塞米松的同时摄入供试品。

服用一段时间供试品后，我们收集斑马鱼样本，制作病理切片，进行苏木素-伊红染色，观察肌肉组织的肌肉组织形态的变化。

【结果展示】

图1. 肌肉组织病理切片表型图

从实验结果可以看到，正常对照组斑马鱼肌肉组织形态正常，肌细胞细而长，呈纤维状，排列紧密，横纹明暗相间排列。地塞米松处理后，斑马鱼肌肉组织结构松散，排列不整齐。而供试品组斑马鱼肌肉组织松散程度较模型对照组有所改善，排列较模型对照组有规律，具有改善肌少症功效。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用或注射供试品组的斑马鱼肌肉组织病变程度较模型对照组有所改善，排列较模型对照组有规律。

2.本实验证实供试品具有改善肌少症功效。

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